Ce texte constitue une adaptation des notes de Pierre-Arthur MOREAU, avec l'aimable autorisation de l'auteur.
Comment procéder !
Cette technique demande du soin et de la méticulosité, si on souhaite obtenir des préparations spectaculaires ; elle est rarement réussie au 1er essai ... surtout, pas de découragement !
réaliser un scalp assez épais à la lame de rasoir ; il nous apparaît plus facile de " peler " le champignon en enlevant une " épluchure " d' 1/2 cm de large ; il en résulte un fragment de scalp qui va en s'amenuisant et l'extrémité est quasi prête à l'emploi.
le retourner sur l'ongle et gratter délicatement toute la chair avec la lame de rasoir (en cuisine, " émincer " ! --> c'est une manipulation délicate qui demande du soin) ; diviser le scalp obtenu en deux parties (la seconde partie sera utilisée pour la recherche des dermatocystides SV+).
ATTENTION ! ne pas oublier de replacer le fragment préparé à l'endroit.
La recherche des incrustations peut s'effectuer selon deux techniques.
La méthode différentielle de MELZER
Modus operandi :
déposer sur la partie gauche d'une lame porte-objet une goutte de Fuchsine de Ziehl ; préparer au centre une goutte d'eau de rinçage et à droite une goutte d'acide chlorhydrique dilué à 5 %.
déposer le morceau résultant du grattage dans la Fuchsine de Ziehl et y laisser le scalp durant 2 à 3 minutes.
faire glisser la scalp dans l'eau et rincer.
faire glisser la scalp dans HCl à 5 %, placer la lame couvre objet et observer :
--> les incrustations apparaissent comme des petites masses bleu mauve réparties comme une chaussette autour de la dermatocystide. Sur une préparation bien faite, les incrustations sont les seules éléments non décolorés par l'acide.
La méthode de BLUM
Modus operandi :
déposer sur la partie gauche d'une lame porte-objet une goutte de Fuchsine de Ziehl et la diluer avec une goutte d'eau (= FZ à 50 %)
déposer le morceau résultant du grattage dans la solution de Fuchsine de Ziehl et y laisser le scalp durant 5 à 10 minutes
faire glisser la scalp dans l'eau ; placer la lame couvre objet et observer :
--> les incrustations apparaissent comme des petites masses bleu mauve ré- parties comme une chaussette autour de la dermatocystide, mais non contrastées avec le fond, qui est seulement plus clair. Méthode valable uniquement sur matériel frais.
Quelques remarques :
les incrustations acido-résistantes peuvent se trouver sur les dermatocystides et sur les hyphes primordiales ;
ATTENTION de ne pas confondre les incrustations acido résistantes qui se trouvent à l'extérieur des cystides, avec des granulations internes des cystides qui sont parfois aussi vivement colorées (il s'agit alors de contenus vacuolaires).
Quelques ASTUCES :
quand une russule est âcre, elle n'a pas d'incrustations (sauf R. rubra qui est rouge à odeur de miel, R. rutila qui est rouge à sporée foncée et R. ochroleuca)
les russules " incrustées " ont une cuticule pruineuse ou mate ; cependant, R. badia est pruineuse et non incrustée tandis que R. integra est incrustée et non pruineuse (c'est assez amusant, du fait qu'elles sont quasi des sosies).
LES SPORES :
les spores de russules sont amyloïdes : elles réagissent au réactif de Melzer (iodo-ioduré)
pour mesurer les crêtes, il faut choisir des spores qui ont l'apicule de côté
les crêtes et les connectifs (réseau) s'observent sur la partie avant de la spore
les mesures de la spore se prennent avec l'apicule de côté, et sans compter la longueur des crêtes
Pour voir tous les éléments de l'épicutis :
décaper le scalp à l'eau de Javel durant 30 secondes
rincer à l'eau
colorer au Rouge Congo ammoniacal (pour un exsiccatum) ou au Rouge Congo SDS (pour du matériel frais)
ATTENTION ! cette pratique permet de rendre la préparation plus lisible, et plus facile à dessiner ou à photographier, MAIS il n'est plus possible après ce traitement, de diagnostiquer une réaction SBA ou de mettre en évidence des incrustations.